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反向 PCR的特點(diǎn)
日期：2025-04-19 09:39
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摘要：
常規(guī) PCR 是擴(kuò)增兩引物之間的 DNA 片段,反向 PCR(reverse PCR)是用引物來擴(kuò)增兩引物以外的 DNA 片段。
一般先用限制性內(nèi)切酶酶解 DNA(目的基因中不存在該酶的酶切位點(diǎn),且片段應(yīng)短于2～3kb),然后用連接酶使帶有黏性末端的靶片段自身環(huán)化,后用一對反向引物進(jìn)行 PCR,得到的線性 DNA 將含有兩引物外側(cè)的未知序列。該技術(shù)可對未知序列擴(kuò)增后進(jìn)行分析,如探索鄰接已知 DNA 片段的序列。
反向 PCR 已成功地用于僅知部分序列的全長 cDNA 克隆,Picter 中曾用此法擴(kuò)增基因文庫的插入 DNA。
常規(guī) PCR 是擴(kuò)增兩引物之間的 DNA 片段,反向 PCR(reverse PCR)是用引物來擴(kuò)增兩引物以外的 DNA 片段。
一般先用限制性內(nèi)切酶酶解 DNA(目的基因中不存在該酶的酶切位點(diǎn),且片段應(yīng)短于2～3kb),然后用連接酶使帶有黏性末端的靶片段自身環(huán)化,后用一對反向引物進(jìn)行 PCR,得到的線性 DNA 將含有兩引物外側(cè)的未知序列。該技術(shù)可對未知序列擴(kuò)增后進(jìn)行分析,如探索鄰接已知 DNA 片段的序列。
反向 PCR 已成功地用于僅知部分序列的全長 cDNA 克隆,Picter 中曾用此法擴(kuò)增基因文庫的插入 DNA。